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        UniTaq SYBR qPCR Master Mix(含ROX)

        價 格 1000

        UniTaq SYBR qPCR Master Mix(含ROX)

        1000

        貨號

        P1503

        規格

        5ml

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        產品簡介 使用說明 產品FAQ 產品參數

        • 產品參數
        • 貨號P1503

        • 商品名稱UniTaq SYBR qPCR Master Mix(含ROX)

        • 規格5ml

        • 價格1000

        UniTaq SYBR qPCR Master Mix含ROX

        【產品簡介】

        本產品是使用SYBR Green I 嵌合熒光法進行qPCR反應的專用預混液。核心組分Taq Polymerase是基于抗體法修飾的熱啟動聚合酶,具有特異性強、檢測靈敏度高、擴增產量高等特點。配合特殊優化的buffer,可進行高特異性、高靈敏的qPCR擴增。本產品含有特殊的ROX,適配常用的qPCR儀器,無需在不同儀器上調整ROX的濃度。本產品是一款2×預混液,只需加入引物和模板即可進行擴增。


        【適用范圍】

        本試劑用于DNA樣本的擴增,可以擴增各物種來源的DNA,樣本類型可以是基因組DNA、cDNA、質粒DNA等


        優點實例

        1、良好的擴增均一性:

           實例一:

        以HELA細胞cDNA為模板(10ng/20ul體系,以RNA量為準)擴增內參基因ACTIN-B,默認程序,48孔重復實驗,最大孔間差<0.4CT(0.39)。

           


        實例二:

        以HELA細胞cDNA為模板,進行10倍梯度稀釋,四個濃度梯度,用ACTIN-B基因進行擴增,默認測序,擴增結果具有良好的一致性。




        2、更廣的可定量擴增區域

         


        以N-蛋白質粒為擴增模板,梯度稀釋(1×108~10拷貝數)后進行絕對定量擴增測試,每孔上1ul模板(20ul體系/孔),默認程序下,均能有效特異的擴增且具有良好的定量精準度和曲線線性。

         



        3、高分辨力:

         

        以HELA細胞cDNA為模板,進行2倍梯度稀釋,10個濃度梯度,用ACTIN-B基因進行擴增,默認程序擴增,結果可以看到本產品能準確的分辨2倍稀釋的樣品且擴增高度特異。



         

        4、良好的檢出率:

         

        以HELA細胞cDNA為模板(10ng/20ul體系,以RNA量為準)對12個隨機基因進行擴增測試,結果顯示均能特異性擴增。

         




        【貨    號】 P1503-S

        【保存條件】-20℃避光保存1年,解凍后可于2~8℃避光存放6個月;低溫運輸。


        【使用說明】

        1、反應液配制(以20ul體系為例)

        試劑名稱

        使用量

        終濃度

        2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix

        Forward Primer(10uM)

        Reverse Primer(10uM)

        DNA sample

        RNase free water

        10 ul

        0.6 ul

        0.6 ul

        X ul

        Up to 20ul

         

        0.3 uM

        0.3 uM

         

        注:a、引物的添加量以各引物的最終濃度為0.2~0.6uM,當擴增效率低時,可通過優化添加量來提高反應性能,

               但要注意添加量過多時可能會產生非特異 性擴增。    

            b、如模板為未稀釋的cDNA原液,使用體積不應超過反應總體積的1/10,過高的模板量會抑制反應的正常進行。

         

        2、反應條件

        qPCR的基礎循環為例,具體循環條件可根據需要進行調整。

        a、該預變性條件適合大多數擴增反應,如模板結構復雜,可將預變性時間延長至5min以獲得更好的效果。

        b、延伸的溫度請在55~72℃的范圍內進行優化,可改善檢測的靈敏度。c、融解程序使用默認程序。

        【注意事項】

        1、使用前應完全解凍,混勻后再使用。

        2、本品應盡量避免反復凍融,以免造成酶活性的下降和dNTPs的降解。如每次用量較少,推薦小份分裝使用。

        3、由于本產品檢測靈敏度極高,易被空氣中的氣溶膠污染,因此配制混合體系時請于超凈工作臺中操作,配制過程中請使用滅菌槍頭、反應管,條件允許時使用專用移液器和帶濾芯的吸頭



        【FAQ】

        ◇擴增曲線異常

        1、擴增曲線非正常抖動:信號強度弱,通過系統矯正后產生。提高模板上樣量重復實驗或更換高質量模板。

        2、擴增曲線斷裂或下滑:模板濃度過高產生了反應抑制;基線扣除錯誤。降低模板上樣量或將模板稀釋后再上樣;手動調整基線終點至CT值-3,重新分析

        3、偶發個別曲線驟降:反應孔內有氣泡殘余。加樣時要小心,進行反應前要仔細檢查反應孔內是否有氣泡殘余,若有,可輕彈后離心即可消除。


        ◇擴增結束后無擴增曲線出現

        1、確認程序中是否設置了信號采集步驟:兩步法中,信號采集設置在退火延伸階段;三步法中,信號采集設置在72℃延伸階段。

        2、確認引物是否降解:長時間未用的引物應先通過PAGE電泳檢測完整性,以排除由于引物降解導致無擴張現象。

        3、模板濃度太低:減少稀釋度重新實驗,一般從高濃度開始做起。

        4、模板降解:重新制備模板,重復實驗。


        ◇CT值較大

        1、擴增效率極低:優化實驗條件,嘗試三步法擴增程序,或重新設計合成高特異引物。

        2、模板濃度過低:減少稀釋度或增加上樣量。

        3、模板降解:重新制備模板,重復實驗。

        4、反應體系中存在抑制劑:重新制備模板或使用qPCR專用的抽提、反轉試劑盒


        ◇陰性對照出現明顯擴增

        1、反應體系存在污染:更換新的Master Mix、水、引物重新實驗。配制反應時應避免氣溶膠污染。

        2、引物二聚體出現:根據融解曲線進行分析,必要時重新設計引物。


        ◇融解曲線出現多峰

        1、引物設計不優:根據設計原則重新設計合成引物。

        2、引物濃度過高:適當減低引物濃度

        3、模板存在基因組污染:重新制備模板或使用qPCR專用反轉錄試劑。


        ◇絕對定量標準曲線擬合程度差

        1、加樣誤差:提高模板稀釋倍數,提高加樣體積減少誤差。

        2、標準品降解:重新制備標準品,重復實驗。

        3、模板濃度過高:提高模板稀釋度重新實驗


        ◇實驗重復性差

        1、加樣誤差大:使用性能優良的移液器;提高模板稀釋度,以大體積加樣。

        2、模板濃度過低:模板濃度低,重復性越差,減少模板稀釋度或提高上樣體積。

        3、儀器失準:定期校準儀器。


        暫無評價

        產品簡介

        UniTaq SYBR qPCR Master Mix含ROX

        【產品簡介】

        本產品是使用SYBR Green I 嵌合熒光法進行qPCR反應的專用預混液。核心組分Taq Polymerase是基于抗體法修飾的熱啟動聚合酶,具有特異性強、檢測靈敏度高、擴增產量高等特點。配合特殊優化的buffer,可進行高特異性、高靈敏的qPCR擴增。本產品含有特殊的ROX,適配常用的qPCR儀器,無需在不同儀器上調整ROX的濃度。本產品是一款2×預混液,只需加入引物和模板即可進行擴增。


        【適用范圍】

        本試劑用于DNA樣本的擴增,可以擴增各物種來源的DNA,樣本類型可以是基因組DNA、cDNA、質粒DNA等


        優點實例

        1、良好的擴增均一性:

           實例一:

        以HELA細胞cDNA為模板(10ng/20ul體系,以RNA量為準)擴增內參基因ACTIN-B,默認程序,48孔重復實驗,最大孔間差<0.4CT(0.39)。

           


        實例二:

        以HELA細胞cDNA為模板,進行10倍梯度稀釋,四個濃度梯度,用ACTIN-B基因進行擴增,默認測序,擴增結果具有良好的一致性。




        2、更廣的可定量擴增區域

         


        以N-蛋白質粒為擴增模板,梯度稀釋(1×108~10拷貝數)后進行絕對定量擴增測試,每孔上1ul模板(20ul體系/孔),默認程序下,均能有效特異的擴增且具有良好的定量精準度和曲線線性。

         



        3、高分辨力:

         

        以HELA細胞cDNA為模板,進行2倍梯度稀釋,10個濃度梯度,用ACTIN-B基因進行擴增,默認程序擴增,結果可以看到本產品能準確的分辨2倍稀釋的樣品且擴增高度特異。



         

        4、良好的檢出率:

         

        以HELA細胞cDNA為模板(10ng/20ul體系,以RNA量為準)對12個隨機基因進行擴增測試,結果顯示均能特異性擴增。

         



        使用說明


        【貨    號】 P1503-S

        【保存條件】-20℃避光保存1年,解凍后可于2~8℃避光存放6個月;低溫運輸。


        【使用說明】

        1、反應液配制(以20ul體系為例)

        試劑名稱

        使用量

        終濃度

        2×UniTaq SYBR qPCR Master Mix

        Forward Primer(10uM)

        Reverse Primer(10uM)

        DNA sample

        RNase free water

        10 ul

        0.6 ul

        0.6 ul

        X ul

        Up to 20ul

         

        0.3 uM

        0.3 uM

         

        注:a、引物的添加量以各引物的最終濃度為0.2~0.6uM,當擴增效率低時,可通過優化添加量來提高反應性能,

               但要注意添加量過多時可能會產生非特異 性擴增。    

            b、如模板為未稀釋的cDNA原液,使用體積不應超過反應總體積的1/10,過高的模板量會抑制反應的正常進行。

         

        2、反應條件

        qPCR的基礎循環為例,具體循環條件可根據需要進行調整。

        a、該預變性條件適合大多數擴增反應,如模板結構復雜,可將預變性時間延長至5min以獲得更好的效果。

        b、延伸的溫度請在55~72℃的范圍內進行優化,可改善檢測的靈敏度。c、融解程序使用默認程序。

        【注意事項】

        1、使用前應完全解凍,混勻后再使用。

        2、本品應盡量避免反復凍融,以免造成酶活性的下降和dNTPs的降解。如每次用量較少,推薦小份分裝使用。

        3、由于本產品檢測靈敏度極高,易被空氣中的氣溶膠污染,因此配制混合體系時請于超凈工作臺中操作,配制過程中請使用滅菌槍頭、反應管,條件允許時使用專用移液器和帶濾芯的吸頭


        產品FAQ


        【FAQ】

        ◇擴增曲線異常

        1、擴增曲線非正常抖動:信號強度弱,通過系統矯正后產生。提高模板上樣量重復實驗或更換高質量模板。

        2、擴增曲線斷裂或下滑:模板濃度過高產生了反應抑制;基線扣除錯誤。降低模板上樣量或將模板稀釋后再上樣;手動調整基線終點至CT值-3,重新分析

        3、偶發個別曲線驟降:反應孔內有氣泡殘余。加樣時要小心,進行反應前要仔細檢查反應孔內是否有氣泡殘余,若有,可輕彈后離心即可消除。


        ◇擴增結束后無擴增曲線出現

        1、確認程序中是否設置了信號采集步驟:兩步法中,信號采集設置在退火延伸階段;三步法中,信號采集設置在72℃延伸階段。

        2、確認引物是否降解:長時間未用的引物應先通過PAGE電泳檢測完整性,以排除由于引物降解導致無擴張現象。

        3、模板濃度太低:減少稀釋度重新實驗,一般從高濃度開始做起。

        4、模板降解:重新制備模板,重復實驗。


        ◇CT值較大

        1、擴增效率極低:優化實驗條件,嘗試三步法擴增程序,或重新設計合成高特異引物。

        2、模板濃度過低:減少稀釋度或增加上樣量。

        3、模板降解:重新制備模板,重復實驗。

        4、反應體系中存在抑制劑:重新制備模板或使用qPCR專用的抽提、反轉試劑盒


        ◇陰性對照出現明顯擴增

        1、反應體系存在污染:更換新的Master Mix、水、引物重新實驗。配制反應時應避免氣溶膠污染。

        2、引物二聚體出現:根據融解曲線進行分析,必要時重新設計引物。


        ◇融解曲線出現多峰

        1、引物設計不優:根據設計原則重新設計合成引物。

        2、引物濃度過高:適當減低引物濃度

        3、模板存在基因組污染:重新制備模板或使用qPCR專用反轉錄試劑。


        ◇絕對定量標準曲線擬合程度差

        1、加樣誤差:提高模板稀釋倍數,提高加樣體積減少誤差。

        2、標準品降解:重新制備標準品,重復實驗。

        3、模板濃度過高:提高模板稀釋度重新實驗


        ◇實驗重復性差

        1、加樣誤差大:使用性能優良的移液器;提高模板稀釋度,以大體積加樣。

        2、模板濃度過低:模板濃度低,重復性越差,減少模板稀釋度或提高上樣體積。

        3、儀器失準:定期校準儀器。


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