RIPA裂解液（弱）
【產品簡介】
RIPA裂解液是一種傳統的細胞組織快速裂解液。RIPA裂解液裂解得到的蛋白樣品可以用于常規的PAGE、Western、免疫沉淀、免疫共沉淀和ELISA等。
【貨 號】 P1025
【規 格】 100ml/瓶
【保存條件】 -20℃保存，有效期為1年。
【使用說明】
1.本產品是一款傳統的細胞組織裂解液，該緩沖液與許多應用相容包括SDS-PAGE,western blot，免疫沉淀和ELISA等。
2. 本產品的主要成分1%NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS以及含有 EDTA, sodium fluoride, sodium orthovanadat等抑制劑，如果需要，可將多種酶抑制劑添加到試劑中以防止蛋白質水解并維持蛋白質的磷酸化狀態。
3. 裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不建議用 Bradford 法測定蛋白濃度，可 以選用 BCA 蛋 白定量試劑盒測定蛋白濃度。
對于培養細胞樣品：
溶液在使用前數分鐘內加入相應量的PMSF，使PMSF的最終濃度為1mM或者根據實驗需 要加入適當的蛋白磷酸酶抑制劑混合物。
貼壁細胞：
計數后去除培養液，細胞刮收集細胞，200g離心5min，用PBS、生理鹽水清洗多次。 按照2×10 6細胞約6孔板每孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數 下，使裂解液和細胞充分接觸。置于冰上，于搖床上裂解30分鐘。
懸浮細胞：
離心收集細胞，輕輕vortex或者彈擊管底以把細胞盡量分散開。按照5×10 5細胞數每 孔加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液充分裂解細胞。裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。
可根據需要進行超聲裂解，充分裂解后，10000-14000g 4℃離心10分鐘，取上清，即為蛋白提取物，可進行后續操作。
對于組織樣品：
1、把組織放于預冷的PBS或生理鹽水中漂洗數次，將組織剪切成細小的組織碎片。對于心臟，腎臟等含血量豐富的應多次洗滌，確保無血液干擾。
2、取適當量的裂解液，在使用前數分鐘內加入PMSF，使PMSF的最終濃度為lmM，或者根據實驗需要加入適當的蛋白酶磷酸酶抑制劑混合物。
3、稱量組織，按照每20毫克組織加入150-250ul裂解液的比例加入裂解液，即組織 凈重（mg）：裂解液（ul）=1:10 的比例，然后立即進行勻漿。用玻璃勻漿器快速勻漿，直至肉眼觀察無明顯組織塊，然后再冰上裂解30分鐘左右，直至充分裂解。也可以把組織樣品冷凍后液氮研磨，研磨充分后加入裂解液進行裂解。
4、充分裂解后，10000-14000g 4℃ 離心5-10分鐘，取上清，即可進行后續蛋白分析等操作。
【注意事項】
1.裂解樣品的所有步驟都需要在冰上進行。
2.為了取得最佳的使用效果，盡量避免反復凍融，建議分裝保存使用
3.為了您的身體安全及健康，請穿實驗服及佩戴一次性手套操作。
4.本產品僅限于科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不得用于食品或藥品。
020-3107 8154
